皮膚是人體zui大的器官，是外源化學(xué)因素(化學(xué)品、藥品等)或物理機(jī)械因素(紫外線)毒性作用的器官。傳統(tǒng)的皮膚安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)不僅要求一定數(shù)量的動(dòng)物，而且試驗(yàn)周期長(zhǎng)，成本高。隨著凍干技術(shù)的出現(xiàn)，利用
凍干機(jī)制備人工皮膚的方法，該方法培養(yǎng)周期短，皮膚功能和活性在體外維持時(shí)間長(zhǎng)。能滿足毒性檢驗(yàn)領(lǐng)域的需要。
利用
凍干機(jī)制備的人工皮膚可用于進(jìn)行皮膚毒性測(cè)試是藥品、食品添加劑及原料、農(nóng)藥、生物制品、化學(xué)品健康安全評(píng)價(jià)的常用檢測(cè)項(xiàng)目。
制作由膠原與細(xì)胞外基質(zhì)混合物組成的復(fù)合膠原支架：
1、在無(wú)菌條件下將膠原浸泡于冰冷-4'C、0.1%的醋酸溶液中，膠原濃度為8-10mg/Ml范圍，調(diào)節(jié)PH值到7.2—7.3制備膠原溶液，操作應(yīng)在4"進(jìn)行；
2、在膠原溶液中加入L)步驟所得的細(xì)胞外基質(zhì)混合物，得到復(fù)合膠原溶液，復(fù)合膠原溶液中細(xì)胞外基質(zhì)混合物與膠原的質(zhì)量比例為2-2.5:7.5-8;
3、取Lml制備好的復(fù)合膠原溶液置于孔徑為3.5Cm的圓形模具中或6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用0.Lml的1%—1.5%的戊二醛溶液4'C共價(jià)交聯(lián)24士0.5小時(shí)，用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗2-3次，制成海綿狀復(fù)合膠原基質(zhì)；
將復(fù)合膠原基質(zhì)用波長(zhǎng)254nm、36W的紫外線照射除菌后放置在低溫冰箱冷凍過(guò)夜12-18小時(shí)，然后再在真空低溫條件下，
凍干機(jī)真空冷凍干燥24土1小時(shí)，即可得到制備復(fù)合膠原支架。
